水中苯甲酸鈉標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的研制（一）

近年來食品安全事故頻發(fā)，食品安全問題愈發(fā) 突出，其中食品添加劑的使用備受關(guān)注［1］。防腐劑 作為食品添加劑的重要組成部分，在食品生產(chǎn)加工 過程中添加適量防腐劑可有效防止由微生物引起 的食品腐變質(zhì)，延長食品保質(zhì)期或保證食品安全 等［2–5］。苯甲酸鈉在空氣中比較穩(wěn)定且成本較低，應(yīng) 用極為廣泛［6–7］。苯甲酸鈉作為食品添加劑，必須 嚴(yán)格按照 GB 2760–2014《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食 品添加劑使用標(biāo)準(zhǔn)》的規(guī)定*添加，嚴(yán)禁超標(biāo)使 用［8］。苯甲酸鈉在酸性條件下溶解度較低，生產(chǎn)過 程中攪拌不均勻會(huì)導(dǎo)致食品局部苯甲酸鈉超標(biāo)，食 用后直接影響人體健康甚至危及生命［9–10］。因此苯 甲酸鈉應(yīng)在嚴(yán)格受控的情況下使用，添加含量也應(yīng) 準(zhǔn)確測量。 目前測定苯甲酸鈉的方法為液相色譜 – 紫外可 見分光光譜法。GB 2760–2014 標(biāo)準(zhǔn)中允許使用苯 甲酸作為標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)對(duì)苯甲酸鈉進(jìn)行定量分析，同一 物質(zhì)的量濃度的苯甲酸和苯甲酸鈉在液相色譜 – 紫 外可見分光光譜法下的譜圖基本重合，苯甲酸及苯 甲酸鈉具有一致的表征結(jié)果，可相互替代使用。但 基于其它原理的檢測方法，此兩種物質(zhì)不能通用。 隨著待測食品種類擴(kuò)大和食品基質(zhì)成分復(fù)雜化，食 品中非待測成分干擾日益增多，對(duì)樣品純化和檢測 方法要求越來越高［11］。發(fā)展低成本，高靈敏度，操 作簡單，分析時(shí)間短，環(huán)境友好型測定方法將是今后 研究的方向［12］。目前國內(nèi)外只有苯甲酸純度標(biāo)準(zhǔn) 物質(zhì)，尚無苯甲酸鈉有證純度標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)或溶液標(biāo)準(zhǔn) 物質(zhì)［13］。筆者研制的水中苯甲酸鈉標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的標(biāo) 準(zhǔn)值為 (23.6±0.3) mg／L，有效期為 6 個(gè)月，達(dá)到國 家二級(jí)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)要求。該標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)具備良好的均勻性和穩(wěn)定性，可用于食品檢驗(yàn)、衛(wèi)生檢疫等部門對(duì)食 品防腐劑苯甲酸分析方法的確認(rèn)與評(píng)價(jià)、儀器校準(zhǔn) 與檢測質(zhì)量控制［14–15］。

1 實(shí)驗(yàn)部分 

1.1 主要儀器與試劑

高效液相色譜儀：（1）HPLC–1260 型，配有紫外 檢測器，安捷倫科技（中國）有限公司，（2）LC–20A 型，配有二極管陣列檢測器，日本島津貿(mào)易有限 公司；質(zhì)譜儀：LTQ FT Ultra 型，增強(qiáng)線性離子阱回旋 組合，配備 Finnigan Xcalibur 數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)，美國賽 默飛世爾科技公司； 原子吸收光譜儀：Pin AAcle 900T 型，美國珀金 埃爾默公司； 紫外可見分光光度計(jì)：TU–1810 PC 型，北京普 析通用儀器有限責(zé)任公司； 電子天平：BT125D 型，感量為 0.000 01 g，德國 賽多利斯集團(tuán)有限公司； 純水制備器：UPR–II–10T 型，四川優(yōu)普超純科 技有限公司； 醋酸銨：分析純，北京化學(xué)工業(yè)集團(tuán)有限責(zé)任 公司；甲醇：色譜純，美國飛世爾科學(xué)世界公司； 苯甲酸鈉：純度標(biāo)示值為 (99.4±1.0)%，德國 Dr.Ehrenstorfer 公司； 實(shí)驗(yàn)用水為超純水。

1.2 儀器工作條件 

1.2.1 液相色譜

色譜柱：C18 柱 (250 mm×4.6 mm，5 μm，美國 安捷倫科技有限公司 ) ；柱溫：室溫；流動(dòng)相：甲醇 +0.02 mol／L 乙酸銨水溶液 ( 體積比為 6∶94)，流量： 1.0 mL／min ；進(jìn)樣體積：20 μL ；檢測器：二極管 陣列檢測器；波長：230 nm。 

1.2.2 質(zhì)譜

ESI 源：負(fù)離子檢測；掃描范圍：100～600 amu ； 鞘氣流量：1.5 mL／min ；輔助氣流量：0.6 mL／min， 源電壓：3.50 kV ；毛細(xì)管溫度：275℃；毛細(xì)管電壓： 35 V ；透鏡電壓：115 V。

1.3 苯甲酸鈉純度驗(yàn)證 

1.3.1 定性分析

采用高分辨質(zhì)譜法、核磁共振法 ( 氫譜、碳譜 )、 紫外吸收光譜法、紅外吸收光譜法進(jìn)行定性分析。 1.3.2 定量分析 采用原子吸收光譜法排除鉀鹽污染，測定試樣 中鈉鹽的純度。

1.4 水中苯甲酸鈉標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的制備

以苯甲酸鈉、純水為原料，于 (20±5)℃室溫條 件下采用重量 – 容量法配制。取原料物質(zhì)于 105℃ 高溫烘箱中恒溫干燥，分別稱取 0.023 61，0.023 62， 0.023 63 g 經(jīng)驗(yàn)證的苯甲酸鈉純品于燒杯中，用少量 水溶解，分別轉(zhuǎn)移至 1 L 容量瓶中，燒杯用適量水洗 滌后一并轉(zhuǎn)入容量瓶，定容至標(biāo)線，再轉(zhuǎn)移至儲(chǔ)液瓶 中，混勻，在潔凈的環(huán)境中，采用 RFJ 安瓿瓶熔封機(jī) 將制備好的溶液分裝至 500 只 5 mL 的潔凈安瓿瓶 中，編號(hào)，避光保存。

1.5 均勻性檢驗(yàn) 

在隨機(jī)數(shù)表中任意第 31 行和第 10 列交 叉數(shù)為起點(diǎn)，往右連續(xù)取 3 個(gè)數(shù)，得到所需抽樣編 號(hào)，大于 500 的數(shù)舍去，直至獲得 15 個(gè)隨機(jī)數(shù)依次 為 225#，196#，214#，364#，042#，390#，430#，380#，415#， 145#，300#，221#，356#，346#，070#，取出相應(yīng)編號(hào)的安 瓿瓶，每瓶樣品分裝至 2 個(gè)進(jìn)樣小瓶中，分別采用紫 外檢測器進(jìn)行平行測定。

1.6 穩(wěn)定性檢驗(yàn)

1.6.1 長期穩(wěn)定性

在室溫恒溫、干燥及避光的保存條件下對(duì)標(biāo)準(zhǔn) 物質(zhì)進(jìn)行 6 個(gè)月的連續(xù)測定。隨機(jī)抽取 3 瓶樣品， 每瓶樣品測定 2 次，樣品配制當(dāng)天開始，每間隔 1 個(gè) 月考察 1 次。

1.6.2 短期穩(wěn)定性

模擬標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)運(yùn)輸和傳遞過程，隨機(jī)抽取 3 瓶 樣品于 35～40℃環(huán)境中，時(shí)間跨度為 7 天，每瓶樣品 平行測定 2 次。